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一群由穷凶极恶的死刑犯组成的特种小队，小丑女、死亡射手、回旋镖队长、黑蜘蛛、冰霜杀手、鲨鱼王、克格勃野兽等人，受制于植入脑后的纳米炸药，他们被迫受命闯入阿卡姆疯人院，去取得一份被谜语人窃走的秘密名单。小队成员互相猜忌，各怀心思，哥谭的黑暗骑士又会不会任由自杀小队完成任务呢？囚禁于阿卡姆的小丑和其他恶人又会对任务造成怎样的影响？

在崇山峻岭之间，塔莉娅（莫蕾娜·巴卡林 Morena Baccarin 配音）和儿子达米安（Stuart Allan 配音）隐居于此。他的外公瑞斯组建并训练刺客联盟，期待着下一个继任者的成长。谁知就在这一天，瑞斯当初的得意弟子“丧钟”斯莱德·威尔逊（Thomas Gibson 配音）带着叛变的刺客杀来，一番激战过后，瑞斯不幸身亡。在此之后，来不及悲伤的塔莉娅带着达米安来到哥谭市，寻找儿子的生身父亲蝙蝠侠布鲁斯·韦恩（杰森·奥玛拉 Jason O'Mara 配音）。从未谋面的父子，展开了磕磕绊绊的相处。
　　与此同时，丧钟的野心持续膨胀，当他的触角伸向哥谭市时，他终将和蝙蝠侠父子迎来一场大战…

在一个本应平和的日子里，美国队长（罗杰·克莱格·史密斯 Roger Craig Smith 配音）和钢铁侠（Adrian Pasdar 配音）两个好友彼此角力，互不服输，但彼此的友情也在这一过程中得到见证。另一方面，野心勃勃的红骷髅（Liam O'Brien 配音）绝不甘心此前的败绩，他雇来掌握了复仇者联盟超级英雄们全部技能的模仿大师（Clancy Brown 配音），发誓要彻底摧毁美国队长和钢铁侠这两个难缠的对手。按照之前的计划，一队九头蛇士兵入侵斯塔克的飞船，盗走了威力强大的斥力加农炮；与此同时，美国队长遭遇模仿大师，最终成为对方的俘虏，面临着被红骷髅转化的厄运。
　　在红骷髅的阴谋驱使下，一对昔日好友成为了正邪死敌…

克隆人士兵锤头发生了严重的神经紊乱，并造成了一名绝地大师的死亡。为了找出他的行事动机，安纳金护送锤头回到卡米诺星球进行检查。

无忧无虑的精灵谷中央，对一切事物都充满好奇心并勇于挑战新鲜事物的小仙子萨瑞娜（克里斯蒂娜·亨德里克斯 Christina Hendricks 配音），被加利仙子派遣管理仙尘。虽然加利仙子再三告诫她严禁篡改仙尘，但终究无法阻挡萨瑞娜踏足未知领域的渴望。受到批评后，萨瑞娜失落地离开精灵谷。一年后，在小精灵的盛大庆典上，萨瑞娜突然返回，她催眠了会场内绝大部分小精灵，并盗走了珍贵的蓝色仙尘投奔海盗。　　侥幸逃过一劫的小叮当（梅·惠特曼 Mae Whitman 配音）和伙伴们发现自己的魔法正在流失，为了拯救精灵谷，她们尾随着萨瑞娜踏上新的冒险之旅……

莱克斯·卢瑟试图借助时间掌控者的力量回到过去将正义联盟扼杀在摇篮中。